| 1 | DOTAP脂质体介导VEGF基因转染人脂肪干细胞及目的基因的表达显示文摘目的:研究脂质体介导的血管内皮生长因子(VEGF)基因转染人脂肪干细胞(hASCs)及VEGF的表达。方法:胶原酶消化吸脂术脂肪,收获细胞沉淀,培养至第4代时利用流式细胞术检测细胞表型,并诱导其成脂成骨分化,鉴定为hASCs。转染组利用DOTAP脂质体将pIRES2-EGFP-VEGF质粒转入hASCs,对照组为脂质体空载。免疫荧光染色检测hASCs内VEGF的表达,ELISA检测上清液中VEGF浓度的变化。结果:1ml吸脂术脂肪可得到(4.38±0.21)×10^5个细胞,第4代时hASCs高表达CD90(81.49%),低表达CD19(6.37%)、CD31(14.91%)、CD34(17.56%)和CD45(15.39%),诱导分化后油红O和茜素红染色均呈阳性。分光光度计显示质粒DNA浓度为595ng/μl。转染组hASCs表达GFP和VEGF,转染效率为(43.69±18.53)%;对照组不表达GFP,但表达较低的VEGF。转染组VEGF的光密度是对照组的2.13倍,其上清液中的VEGF浓度随时间显著上升,与对照组相比差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:DOTAP脂质体可成功将pIRES2-EGFP-VEGF质粒转入hASCs,转染后的VEGF表达和分泌水平显著提高。 | 陈犹白 张启旭 Butler C E 吴叶文 张丽萍 董江陵 陈聪慧 韩岩 | 2016 | 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志2016，30，12： | 6 |
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