黑曲霉菌为宿主菌的重组表达性质粒的构建

查看全文 作　　者：[1]刘钟滨;David J [2]Jeenes;David B [2]Archer

机构地区：[1]同济大学医学院微生物与免疫学教研室,上海200331;[2]InstituteofFoodResearch

出　　处：《同济大学学报(医学版)》索引2001年第22卷第3期,共3页

基　　金：铁道部科技基金B0 0 ( 4 0 ) 摘　　要：目的建立以pyrG基因为选择标志 ,以黑曲霉菌为宿主菌的蛋白质表达系统。方法以PCR扩增获得的黑曲霉菌 pyrG基因的部分序列片段为探针作两次噬菌斑原位杂交 ,从黑曲霉菌ATCC 12 0 49基因文库中克隆获得长度为 9.8kb的DNA片段 ,将其中含 pyrG基因的 2 .3kb片段亚克隆至表达性载体PIGF中 ,获得重组质粒。对克隆基因进行了全基因测定和分析。以黑曲霉菌ATCC 12 0 49的 pyrG缺陷株M 5 4为受体菌 ,用聚乙二醇 /氯化钙方法作基因转化实验 ,将重组质粒导入该受体菌并在其中表达。结果从黑曲霉菌ATCC 12 0 49基因文库中克隆获得了pyrG基因 ,构建了含该基因的重组表达性载体 pYG1.2。序列分析表明该基因与黑曲霉菌L112的 pyrG基因编码序列的同源性为 93 .9% ,两者经推导的氨基酸的同源性为 98.9%。重组质粒 pYG1.2可使黑曲霉菌ATCC 12 0 49的 pyrG缺陷株M5 4发生基因转化 ,成为Pyr+ 。结论在克隆了 pyrG基因的基础上成功构建了以 pyrG基因为选择标志。 关键词：重组质粒构建黑曲霉菌

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