小麦胚乳14-3-3蛋白的表达及其与淀粉体淀粉合成酶的互作

查看全文 作　　者：[1]宋健民;[1]戴双;[1]李豪圣;[1]刘爱峰;[1]程敦公;[1]楚秀生;Ian J [2]TETLOW;Michael J [2]EMES

机构地区：[1]山东省农业科学院作物研究所,山东济南250100;[2]UniversityofGuelph,Guelph,N1G2W1,Canada

出　　处：《作物学报》索引2009年第35卷第8期,共6页

基　　金：国家自然科学基金项目(30700492);国家高技术研究发展计划(863计划)项目(2006AA100102);国家科技支撑计划项目(2006BAD01A02);引进国际先进农业科学技术计划(948计划)项目[2006-G2(B)];公益性行业科研专项(NYHYZX07-002);“泰山学者”建设工程;山东省农业良种工程项目资助 摘　　要：从小麦胚乳中克隆了14-3-3基因,并将其分别插入pET29c和pET41c质粒,用热激法转化大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RP,得到高效表达的蛋白,但融合蛋白主要以包涵体的形式存在。可溶性的融合蛋白可直接通过S-蛋白琼脂糖树脂纯化。包涵体经8molL-1尿素溶解变性,稀释复性后,结合到S-蛋白琼脂糖树脂上,也得到纯化的融合蛋白。复性后的融合蛋白对蔗糖合酶活性表现抑制作用,说明包涵体14-3-3融合蛋白恢复活性。将结合14-3-3融合蛋白的S-蛋白琼脂糖树脂作为诱饵与小麦胚乳淀粉体提取液进行亲和杂交,与14-3-3蛋白特异互作的淀粉合成酶结合到S-蛋白琼脂糖树脂上,Western检测结果表明,淀粉体淀粉合酶I(SSI)、淀粉合酶II(SSII)、淀粉分支酶Iia(SBEIIa)、淀粉分支酶Iib(SBEIIb)和ADP焦磷酸化酶大亚基(SH2)与14-3-3蛋白存在互作,而淀粉分支酶I(SBEI)、淀粉磷酸化酶(SP)、D-酶(DE)和ADP焦磷酸化酶小亚基(BT2)不能与14-3-3蛋白结合,说明小麦胚乳14-3-3蛋白对淀粉体淀粉合成具有一定的调控作用。 关键词：小麦14-3-3蛋白表达淀粉合成酶蛋白互作

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