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蛋白hSav1和Mst1之间的相互作用

查看全文 作　　者：[1]罗学来 [1]李兆明 [1]严群 [1]李小兰 [1]陶德定 [1]龚建平索引[1]胡俊波 高影响力作者 机构地区：[1]华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤研究所/胃肠外科,武汉430030高影响力机构 出　　处：《华中科技大学学报(医学版)》索引2008年第37卷第6期,共4页高影响力期刊 基　　金：新世纪优秀人才计划资助项目(No.NCET-04-0699);国家自然科学基金资助项目(No.30872472;No.30800569) 摘　　要：目的探讨hSav1(human salvador1)和Mst1(Mammalian STE20-like 1)存在的相互作用,为进一步研究Mst1的功能及相关机制奠定基础。方法以Mst1cDNA全长构建诱饵蛋白载体pGBKT7-Mst1,并对其自身转录活性进行鉴定,利用酵母双杂交系统筛选人胎肝文库,挑选单克隆,从而初步筛选出与Mst1相互作用的蛋白。然后构建初步筛选出的蛋白hSav1的载体pCMV-HA-hSav1,与蛋白Mst1的载体pcDNA/4TO-Flag-Mst1共转染HEK293T细胞,利用相应抗体做二者的免疫共沉淀,以验证蛋白hSav1和Mst1之间的相互作用。其次构建pEGFP-hSav1质粒转染HEK293T,利用免疫荧光观察二者在细胞内的定位。结果以Mst1为诱饵蛋白在人胎肝文库筛选到包括hSav1在内的与之存在相互作用的蛋白。免疫共沉淀结果显示,hSav1蛋白可以在FLAG抗体的免疫沉淀物中检测出来,同样在hSav1抗体的免疫沉淀物中也能检测到蛋白Mst1。免疫荧光的结果显示二者荧光在细胞内存在共定位,二者的荧光可充分融合。结论蛋白hSav1与Mst1在哺乳细胞内存在某种相互作用,为进一步研究Mst1的功能及相关机制提供了线索。 关 键 词：hSav1 Mst1 蛋白相互作用
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