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| 1 | 线粒体融合蛋白2对内毒素致急性呼吸窘迫综合征肺纤维化的影响显示文摘目的从细胞水平观察线粒体融合蛋白2(Mfn2)对内毒素(LPS)致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)肺纤维化形成的影响。方法LPS以浓度梯度及时间梯度作用于人胚肺成纤维细胞(HELF),检测细胞内胶原蛋白表达情况,建立ARDS细胞模型;以复制缺陷型腺病毒作为载体,将Mfn2蛋白转移到HELF中,通过Western blot检测HELF中Mfn2蛋白水平,并运用MTT观察HELF增殖情况,考马斯亮蓝法测定细胞内总蛋白、Sircol胶原测定试剂盒测定胶原蛋白含量。结果LPS浓度为0.5、1、5、10μg/mL刺激HELF 24 h,细胞内胶原蛋白水平分别为(70.97±1.03)、(71.31±0.82)、(76.50±1.31)、(76.84±1.44)μg/mg,与对照组(69.08±2.48)μg/mg相比较差异有统计学意义(P值分别为0.028、0.011、0.000、0.000),且在LPS 5μg/mL时作用显著;LPS(5μg/mL)处理HELF 6、12、24、48 h,细胞内胶原蛋白水平分别为(70.67±0.96)、(73.39±0.80)、(76.01±0.59)、(76.91±0.79)μg/mg,与对照组(69.66±0.99)μg/mg比较差异有统计学意义(P值分别为0.031、0.000、0.000、0.000),并且在24 h时作用明显;LPS以浓度及时间依赖性诱导HELF胶原蛋白的表达,建立ARDS细胞模型适宜的条件为5μg/mL LPS刺激HELF 24 h;同时发现LPS组较对照组Mfn2蛋白表达明显下调(P=0.000),转染Adv-Mfn2后,LPS+Adv-Mfn2组较LPS组Mfn2蛋白表达明显上调(P=0.000);与LPS组相比较,LPS+Adv-Mfn2组HELF 12、24、48 h细胞增殖率(0.93±0.06、1.48±0.03、1.76±0.01)明显降低(P<0.05),且胶原蛋白水平(72.12±0.30)、(73.21±0.26)、(73.46±0.25)μg/mg明显下降(P<0.05)。结论过表达Mfn2能减轻内毒素诱导的肺成纤维细胞增殖并减少胶原产生。 | 许美霞 周贤 戴仲 刘涛 许涛 | 2021 | 重庆医学2021，50，14： | 3 |
| 2 | 复方积雪草对肾小球系膜细胞增殖及Bcl–2与caspase–3表达的影响显示文摘目的观察复方积雪草对IgA1诱导的大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)增殖及凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(B cell lymphoma 2,Bcl-2)和胱天蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达的影响。方法运用高效液相色谱法检测复方积雪草煎剂溶液中主要药物的有效成分含量,按测得的比例配制复方积雪草单体组方溶液。选择合适时间和浓度的Ig A1刺激大鼠GMC,将GMC分为正常组、模型组及缬沙坦高、低浓度组、复方积雪草高、中、低浓度组,CCK-8法检测药物干预后细胞增殖情况,蛋白质印迹法检测Bcl-2、caspase-3蛋白的表达情况。结果CCK-8法检测结果显示,24h时,100μl/mlIg A1刺激GMC,模型组Ig A1刺激造模成功,模型组GMC增殖高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05);复方积雪草高、中、低浓度组,缬沙坦高、低浓度组有明显的抑制GMC增殖作用,与模型组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。蛋白质印迹法检测结果显示,与正常组相比,模型组Bcl-2升高,caspase-3降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,复方积雪草中浓度组、缬沙坦低浓度组的Bcl-2降低,复方积雪草中、低浓度组、缬沙坦低浓度组的caspase-3升高(P<0.05)。结论复方积雪草能明显抑制Ig A1诱导的大鼠GMC的增殖,可下调Ig A1诱导增殖后的大鼠GMC的Bcl-2蛋白表达,同时上调caspase-3蛋白表达。复方积雪草治疗IgA肾病的机制可能是通过调控细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、caspase-3等抑制GMC的增殖。 | 缪建霞 姜雪 曾佳丽 陈洪宇 | 2022 | 中国现代医生2022，60，21： | 1 |
| 3 | 基于生物信息学的IgA肾病基因富集及免疫细胞浸润分析显示文摘目的基于生物信息学对IgA肾病(IgAN)基因表达谱数据进行基因富集分析和免疫细胞浸润分析,旨在研究IgAN相关免疫机制。方法从基因表达集(GEO)数据库获取IgAN肾脏组织的GSE93798整体RNA序列数据,利用limma软件包筛选正常对照与IgAN的差异表达基因;利用ggplot2软件包进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库进行通路富集分析;利用CIBERSORT软件获得免疫细胞浸润矩阵;从GEO数据库获取IgAN肾脏组织的GSE127136单细胞RNA序列数据;利用主成分分析法(PCA)和t分布随机邻接嵌入法(t-SNE)获得亚群细胞、亚群细胞的标记基因,对免疫细胞的标记基因进行GO和KEGG分析。结果与正常对照组相比,IgAN肾组织有243个基因表达显著上调,104个基因表达显著下调;GO分析提示IgAN差异表达基因多与免疫生物过程相关,KEGG通路分析提示IgAN差异表达基因多富集于感染、免疫通路;免疫细胞浸润分析显示初始B细胞和中性粒细胞在IgAN肾脏组织中下调,浆细胞和M2巨噬细胞在IgAN肾脏组织中上调;单细胞测序分析结果提示CD8^(+)T细胞主要参与代谢相关过程,M2巨噬细胞主要参与免疫及代谢相关过程。结论免疫在IgAN的发生发展过程中具有重要作用,CD8^(+)T细胞、M2巨噬细胞参与了该病理生理机制,有可能作为IgAN的干预靶点。 | 金美玲 李艳春 王佳 张敏 李新 赵素梅 徐晨 | 2021 | 中华肾病研究电子杂志2021，10，4： | 0 |
| 4 | 过表达线粒体融合蛋白2对ARDS肺纤维化的抑制作用及其机制研究显示文摘目的探讨过表达线粒体融合蛋白2(Mfn2)对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)肺纤维化的抑制作用及其机制。方法离体培养人胚肺成纤维细胞(HELF),待细胞生长贴壁率达80%以上进行消化传代,选取状态良好的细胞进行实验。给予5 mg/L脂多糖(LPS)刺激制备ARDS细胞模型(LPS组);并将75 mol/L携带线粒体融合蛋白2腺病毒载体(Adv-Mfn2)转染到HELF中(Adv-Mfn2+LPS组);同时设空白对照组(完全培养基培养)和空载腺病毒载体(Adv-vector)+LPS组作为对照。采用磺基罗丹明B(SRB)法观察各组细胞培养0、12、24、36、48 h的增殖情况;Hoechst 33342染色后,共聚焦显微镜下观察细胞形态学改变;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测抗凋亡基因Bcl-2和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的蛋白表达;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Bcl-2和caspase-3的基因表达。结果经LPS刺激12~48 h,LPS组细胞增殖率随时间延长而逐渐增加,而且明显高于空白对照组〔12 h:(10.75±1.51)%比(0.73±1.22)%,24 h:(20.09±1.71)%比(1.15±1.12)%,36 h:(20.58±1.55)%比(1.20±1.12)%,48 h:(21.30±1.51)%比(1.23±1.10)%,均P<0.01〕;LPS组与Adv-vector+LPS组各时间点细胞增殖率比较差异则均无统计学意义;而Adv-Mfn2+LPS组过表达Mfn2后12、24、36、48 h的细胞增殖率分别为(8.93±1.14)%、(10.52±1.24)%、(10.72±1.30)%、(10.91±1.20)%,均较LPS组明显降低(均P<0.05)。共聚焦显微镜下显示,空白对照组细胞核大小不一,部分细胞核碎裂或核固缩,形成凋亡小体;LPS组和Adv-vector+LPS组细胞核呈圆形或椭圆形,大小均匀,仅出现个别凋亡细胞;而Adv-Mfn2+LPS组过表达Mfn2后,凋亡细胞较LPS组增多。Western blotting和RT-qPCR检测结果显示,给予LPS刺激后,LPS组Bcl-2表达较空白对照组明显上调〔Bcl-2蛋白(Bcl-2/GAPDH):0.68±0.01比0.29±0.01,Bcl-2 mRNA(2-ΔΔCT):2.23±0.34比1.00±0.00,均P<0.01〕,而caspase-3的表达较空白对照组明显下调〔caspase-3蛋白(caspase-3/GAPDH):0.37±0.02比0.66±0.02,caspase-3 mRNA(2-ΔΔCT):0.31±0.05比1.00±0.00,均P<0.01〕;与LPS组比较,Adv-Mfn2+LPS组过表达Mfn2蛋白后,Bcl-2表达明显下调〔Bcl-2蛋白(Bcl-2/GAPDH):0.46±0.01比0.68±0.01,Bcl-2 mRNA(2-ΔΔCT):1.45±0.14比2.23±0.34,均P<0.01〕,caspase-3表达明显上调〔caspase-3蛋白(caspase-3/GAPDH):0.54±0.02比0.37±0.02,caspase-3 mRNA(2-ΔΔCT):0.88±0.10比0.31±0.05,均P<0.01〕。结论Mfn2蛋白参与ARDS肺纤维化,可能与线粒体介导的抑制细胞增殖途径有关。 | 安宁 周贤 张晓霞 杨涛 许美霞 | 2021 | 中华危重病急救医学2021，33，7： | 0 |
| 5 | 线粒体融合蛋白2在急性呼吸窘迫综合征大鼠肺纤维化中的表达显示文摘目的:探讨线粒体融合蛋白2(Mfn2)在脂多糖(LPS)致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠肺纤维化过程中的表达规律。方法:48只雄性SD大鼠随机分为Control组、LPS组,每组根据给药后的时间点(1 d、3 d、7 d、14 d)分为4个亚组(T1、T3、T7、T14)。取大鼠肺组织,HE染色光镜下观察肺组织病理变化,并检测肺组织羟脯氨酸(HYP)含量;肺组织切片常规免疫组化染色,检测肺组织中Mfn2的表达;Western Blot及Real time-PCR分别检测Mfn2蛋白、mRNA的表达情况。结果:HE染色显微镜下观察可见LPS组大鼠肺组织出现肺间质纤维化,肺泡结构紊乱;肺组织HYP含量测定显示,LPS组造模后3 d、7 d、14 d HYP含量与Control组比较明显增加(均P<0.05)。免疫组化显示,Control组肺组织中存在Mfn2表达,大鼠气管内滴注LPS 3 d后肺组织Mfn2表达即开始减少;Western Blot及RTPCR检测结果显示,与Control组比较,LPS组造模后3 d、7 d、14 d肺组织中Mfn2蛋白及基因表达均明显下调(均P<0.05)。结论:气管内滴注LPS可诱导大鼠出现急性肺损伤及肺纤维化,在损伤的肺组织中Mfn2表达明显减少,提示Mfn2与内毒素所致大鼠急性肺损伤及肺纤维化密切相关。 | 安宁 许涛 周贤 刘涛 戴仲 许美霞 | 2023 | 武汉大学学报(医学版)2023，44，11： | 0 |
| 6 | 线粒体融合蛋白2在环孢素肾病中的作用显示文摘目的探讨线粒体融合蛋白2(Mfn2)在环孢素A(CSA)引起的慢性肾损伤中的作用及可能的机制。方法制作慢性CSA肾病大鼠模型,将大鼠分为溶剂对照组、CSA模型组和正常对照组。分别检测各组大鼠血肌酐及尿蛋白水平。光镜检查观察肾小管间质损伤情况。电镜观察肾小管上皮内线粒体结构改变,Western blot检测肾组织Mfn2蛋白的表达。结果 CSA模型组造模2、4周血肌酐和尿蛋白水平较正常对照组和溶剂对照组均明显升高(P<0.05)。CSA模型组肾小管间质损伤明显,肾小管上皮细胞内可见线粒体肿胀变形,脊消失。CSA模型组2、4周肾组织Mfn2蛋白的表达明显降低,与正常对照组和溶剂对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);与2周模型组比较,4周组Mfn2蛋白的表达进一步减少(P<0.05)。结论 Mfn2可能在CSA引起的肾小管上皮细胞损伤中发挥重要作用。 | 姜雪 杜园园 | 2021 | 中国医师杂志2021，23，2： | 0 |
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